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當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章PT全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀其核心的操作流程如下

PT全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀其核心的操作流程如下

更新時(shí)間:2025-08-21點(diǎn)擊次數(shù):367
  PT全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀是一種集紫外-可見(jiàn)光吸收、熒光、化學(xué)發(fā)光等多種檢測(cè)模式于一體的高精度分析儀器,廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、臨床診斷、藥物研發(fā)及食品安全等領(lǐng)域。其核心優(yōu)勢(shì)在于寬波長(zhǎng)覆蓋(通常190-1000nm)與多功能檢測(cè)能力,可滿(mǎn)足從基礎(chǔ)科研到工業(yè)生產(chǎn)的多樣化需求。其基于光吸收定律(比爾-朗伯定律),通過(guò)光源發(fā)射特定波長(zhǎng)光,經(jīng)樣品吸收后,檢測(cè)器測(cè)量剩余光強(qiáng)度,計(jì)算吸光度(A)以確定目標(biāo)分子濃度。
  PT全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀的操作需結(jié)合實(shí)驗(yàn)需求(如檢測(cè)模式、樣品類(lèi)型)進(jìn)行參數(shù)設(shè)置和流程控制,核心步驟包括“準(zhǔn)備-設(shè)置-檢測(cè)-數(shù)據(jù)處理”,以下是通用操作流程:
  一、操作前準(zhǔn)備
  樣品與試劑準(zhǔn)備
  確保待檢測(cè)樣品(如ELISA板、核酸溶液、細(xì)胞懸液等)已按實(shí)驗(yàn)方案處理完畢,且微孔板內(nèi)無(wú)氣泡、液滴掛壁(若有氣泡,可輕輕敲擊板壁去除;掛壁液滴需用紙巾吸干邊緣)。
  準(zhǔn)備空白對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品,按預(yù)設(shè)布局排列在微孔板中(建議記錄孔位布局,避免混淆)。
  儀器與環(huán)境檢查
  確認(rèn)酶標(biāo)儀電源線連接正常,開(kāi)機(jī)前檢查樣品室是否清潔(無(wú)灰塵、液體殘留),必要時(shí)用無(wú)塵布擦拭。
  若實(shí)驗(yàn)需溫控(如37℃孵育)或震蕩,提前確認(rèn)儀器相關(guān)功能正常(如溫控模塊是否能達(dá)到設(shè)定溫度)。
  打開(kāi)電腦及酶標(biāo)儀電源,啟動(dòng)配套操作軟件,等待儀器自檢完成(通常顯示“就緒”狀態(tài))。
  二、檢測(cè)方法設(shè)置
  選擇檢測(cè)模式
  根據(jù)實(shí)驗(yàn)類(lèi)型在軟件中選擇對(duì)應(yīng)的檢測(cè)模式:
  吸收光檢測(cè)(如ELISA、核酸定量):需設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)(如450nm主波長(zhǎng)、630nm參比波長(zhǎng))、帶寬(默認(rèn)1-5nm)。
  熒光檢測(cè):需設(shè)置激發(fā)波長(zhǎng)(如485nm)、發(fā)射波長(zhǎng)(如535nm),并選擇頂部/底部讀數(shù)(液體樣品通常選頂部,細(xì)胞培養(yǎng)物可選底部)。
  化學(xué)發(fā)光檢測(cè):無(wú)需設(shè)置波長(zhǎng),直接選擇“化學(xué)發(fā)光”模式,注意關(guān)閉樣品室光源以減少干擾。
  動(dòng)力學(xué)檢測(cè):需額外設(shè)置檢測(cè)時(shí)間間隔(如每10秒讀一次)、總檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)(如30分鐘),并開(kāi)啟溫控(若需恒溫反應(yīng))。
  設(shè)置微孔板參數(shù)
  選擇微孔板規(guī)格(如96孔板、384孔板),并定義檢測(cè)范圍(如“全板檢測(cè)”或指定特定孔位,如A1-H12)。
  若需排除邊緣效應(yīng)或部分孔位,可在軟件中標(biāo)記“不檢測(cè)”孔。
  輔助功能設(shè)置
  溫控:若反應(yīng)需恒溫(如酶促反應(yīng)在37℃),設(shè)置目標(biāo)溫度(誤差通常±0.1℃),并等待儀器預(yù)熱至設(shè)定溫度。
  震蕩:檢測(cè)前需混勻樣品時(shí),設(shè)置震蕩模式(如線性震蕩)、轉(zhuǎn)速(如500rpm)和時(shí)間(如10秒)。
  參比波長(zhǎng)校正(吸收光檢測(cè)):開(kāi)啟“雙波長(zhǎng)檢測(cè)”,通過(guò)參比波長(zhǎng)(如630nm)扣除背景干擾(如微孔板劃痕、氣泡),提高數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
  三、樣品檢測(cè)
  加載微孔板
  輕輕將微孔板放入樣品室的托盤(pán)上,確保板邊緣與托盤(pán)定位槽對(duì)齊(避免位置偏移導(dǎo)致讀數(shù)錯(cuò)誤),關(guān)閉樣品室門(mén)。
  啟動(dòng)檢測(cè)
  在軟件中點(diǎn)擊“開(kāi)始檢測(cè)”,儀器自動(dòng)按預(yù)設(shè)方法運(yùn)行,屏幕實(shí)時(shí)顯示檢測(cè)進(jìn)度(如已完成的孔位、當(dāng)前讀數(shù))。
  檢測(cè)過(guò)程中避免觸碰儀器或打開(kāi)樣品室門(mén),以防干擾光路穩(wěn)定性。
  四、數(shù)據(jù)處理與導(dǎo)出
  查看實(shí)時(shí)結(jié)果
  檢測(cè)完成后,軟件自動(dòng)生成原始數(shù)據(jù)(如吸光度值、熒光強(qiáng)度),并以表格或熱力圖形式展示。
  可查看單孔數(shù)據(jù)、平均值(如標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)孔的均值),或生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(若設(shè)置了標(biāo)準(zhǔn)品濃度)。
  數(shù)據(jù)分析
  根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行數(shù)據(jù)處理:
  定量分析(如ELISA):通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和對(duì)應(yīng)信號(hào)值擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線(線性、四參數(shù)擬合等),軟件自動(dòng)計(jì)算未知樣品濃度。
  比值計(jì)算(如核酸純度):吸收光檢測(cè)中自動(dòng)計(jì)算260/280nm、260/230nm比值,評(píng)估樣品純度。
  動(dòng)力學(xué)曲線:生成“信號(hào)值-時(shí)間”曲線,可計(jì)算反應(yīng)速率、半衰期等參數(shù)。
  數(shù)據(jù)導(dǎo)出與保存
  將數(shù)據(jù)保存為軟件默認(rèn)格式(如.csv、.txt),或?qū)С鲋罞xcel、PDF格式用于報(bào)告撰寫(xiě)。
  建議同時(shí)保存檢測(cè)方法模板(下次相同實(shí)驗(yàn)可直接調(diào)用,無(wú)需重復(fù)設(shè)置)。
  五、操作后整理
  關(guān)閉儀器
  檢測(cè)完成后,取出微孔板,清理樣品室(若有液體泄漏需及時(shí)擦拭)。
  依次關(guān)閉酶標(biāo)儀軟件、儀器電源和電腦電源。
  記錄與清潔
  記錄實(shí)驗(yàn)信息(如檢測(cè)日期、儀器型號(hào)、方法參數(shù)),便于數(shù)據(jù)追溯。
  定期清潔樣品室和托盤(pán)(用75%酒精擦拭,避免腐蝕性試劑殘留),長(zhǎng)期不用時(shí)需覆蓋防塵罩。
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